如何使用 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 進(jìn)行蛋白質(zhì)標(biāo)記？

名稱

中文名稱：PC生物素-PEG3-NHS酯

英文名稱：PCbiotin-PEG3-NHSester

化合物性質(zhì)

CAS號：2353409-93-3

分子式：C36H52N6O15S

分子量：840.89

外觀：黃色實(shí)心

檢測圖譜：1H NMR

儲存條件：-20℃

結(jié)構(gòu)式：

結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 是一種功能化的生物素衍生物，它結(jié)合了生物素、聚乙二醇（PEG）鏈和NHS（N-hydroxysuccinimide）碳酸酯酯基團(tuán)。這種特別的結(jié)構(gòu)使得它在生物分子標(biāo)記和化學(xué)修飾中具有廣泛的應(yīng)用潛力。此外，它還具有光可切割特性，允許在沒有試劑的情況下從streptavidin微球上釋放捕獲的生物分子。

使用 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 進(jìn)行蛋白質(zhì)標(biāo)記的一般步驟如下：

準(zhǔn)備蛋白質(zhì)溶液：將待標(biāo)記的蛋白質(zhì)溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，確保蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和溶解性。

計算試劑用量：根據(jù)蛋白質(zhì)的濃度和需要的標(biāo)記程度，確定 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 的使用量。通常需要進(jìn)行一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來優(yōu)化試劑比例。

反應(yīng)：在適當(dāng)?shù)臈l件下，將 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 加入到蛋白質(zhì)溶液中。該試劑的 NHS 部分會與蛋白質(zhì)上的伯胺基團(tuán)特異性反應(yīng)，形成氨基甲酸酯鍵，從而實(shí)現(xiàn)標(biāo)記。反應(yīng)條件可能會因具體實(shí)驗(yàn)要求而有所不同，一般在室溫或稍高的溫度下進(jìn)行一定時間的孵育。

控制反應(yīng)時間：反應(yīng)時間需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行優(yōu)化，以確保充分標(biāo)記，同時避免過度反應(yīng)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性或其他不良影響。

終止反應(yīng)（可選）：根據(jù)需要，可以通過加入適當(dāng)?shù)拇銣鐒┗蜻M(jìn)行透析等方法來終止反應(yīng)。

純化：標(biāo)記后的蛋白質(zhì)可能需要進(jìn)行純化，以去除未反應(yīng)的試劑和其他雜質(zhì)。可以使用凝膠過濾、透析或其他合適的純化方法。

在整個過程中，需要注意以下幾點(diǎn)：

試劑的保存：PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 對光和溫度敏感，應(yīng)始終保持在低溫干燥、避光的條件下。

緩沖液的選擇：使用適合蛋白質(zhì)穩(wěn)定和反應(yīng)進(jìn)行的緩沖液。

優(yōu)化條件：通過預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化試劑用量、反應(yīng)時間和溫度等條件，以獲得最佳的標(biāo)記效果。

蛋白質(zhì)的質(zhì)量和純度：較高質(zhì)量和純度的蛋白質(zhì)有助于提高標(biāo)記的效率和準(zhǔn)確性。

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