Streptavidin-thiol|巰基化鏈霉親和素

Streptavidin-thiol|巰基化鏈霉親和素

巰基化鏈霉親和素（Streptavidin-thiol），是一種經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的鏈霉親和素，專門(mén)用于生物研究和診斷中的生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)。以下是對(duì)巰基化鏈霉親和素的詳細(xì)介紹：

一、定義與特性

鏈霉親和素是一種高親和力的生物素結(jié)合蛋白，通過(guò)在其分子結(jié)構(gòu)上引入巰基（-SH）功能團(tuán)，使其能夠進(jìn)一步與其他分子或表面進(jìn)行共價(jià)連接。這種修飾不僅保留了鏈霉親和素對(duì)生物素的高特異性和高親和力，還賦予了其更多的生物化學(xué)應(yīng)用特性。

二、制備步驟

巰基化鏈霉親和素的制備通常包括以下步驟：

材料準(zhǔn)備：準(zhǔn)備鏈霉親和素和巰基修飾試劑（如N-琥珀酰亞胺-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯，SPDP）。

溶解與混合：在適當(dāng)?shù)木彌_液中溶解鏈霉親和素，并配制適當(dāng)濃度；將修飾試劑溶解在適量的溶劑中，制備高濃度的修飾試劑溶液。

反應(yīng)：將修飾試劑溶液緩慢加入鏈霉親和素溶液中，維持反應(yīng)體系的pH值在一定范圍內(nèi)（如7.5左右），并在室溫下反應(yīng)一段時(shí)間（如1~2小時(shí)）。

還原：向反應(yīng)混合物中加入還原劑（如DL-二硫蘇糖醇DTT或三(2-羧乙基)膦TCEP），斷開(kāi)二硫鍵，釋放出巰基（-SH）。反應(yīng)在室溫下進(jìn)行一段時(shí)間（如1小時(shí)）。

純化與保存：通過(guò)透析或凝膠過(guò)濾去除未反應(yīng)的修飾試劑和還原劑，得到純化的巰基化鏈霉親和素。將純化后的溶液分裝，并低溫保存（如4°C或-20°C），以防止巰基氧化。

三、應(yīng)用

巰基化鏈霉親和素在生物化學(xué)、免疫學(xué)和納米技術(shù)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用：

表面修飾：可用于修飾金納米顆粒、電極、微孔板等，通過(guò)巰基與金等表面形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵，從而改變這些表面的生物相容性和反應(yīng)性。

共價(jià)連接：可以與其他含有馬來(lái)酰亞胺或其他巰基反應(yīng)性基團(tuán)的分子進(jìn)行共價(jià)連接，用于構(gòu)建復(fù)雜的生物傳感器和診斷試劑。

生物素檢測(cè)：可以結(jié)合生物素標(biāo)記的分子，如抗體、核酸、蛋白質(zhì)等，在免疫分析、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞成像等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。

四、儲(chǔ)存條件與安全性

巰基化鏈霉親和素應(yīng)在低溫條件下儲(chǔ)存，以防止巰基氧化和蛋白質(zhì)變性。在使用時(shí)，應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整其濃度，以獲得最佳的實(shí)驗(yàn)效果。此外，雖然巰基化鏈霉親和素在生物研究中具有廣泛的應(yīng)用，但在使用過(guò)程中仍需注意其安全性，避免對(duì)人體和環(huán)境造成危害。

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