Streptavidin-thiol|巰基化鏈霉親和素

Streptavidin-thiol|巰基化鏈霉親和素

巰基化鏈霉親和素（Streptavidin-thiol），是一種經過化學修飾的鏈霉親和素，專門用于生物研究和診斷中的生物素-鏈霉親和素系統。以下是對巰基化鏈霉親和素的詳細介紹：

一、定義與特性

鏈霉親和素是一種高親和力的生物素結合蛋白，通過在其分子結構上引入巰基（-SH）功能團，使其能夠進一步與其他分子或表面進行共價連接。這種修飾不僅保留了鏈霉親和素對生物素的高特異性和高親和力，還賦予了其更多的生物化學應用特性。

二、制備步驟

巰基化鏈霉親和素的制備通常包括以下步驟：

材料準備：準備鏈霉親和素和巰基修飾試劑（如N-琥珀酰亞胺-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯，SPDP）。

溶解與混合：在適當的緩沖液中溶解鏈霉親和素，并配制適當濃度；將修飾試劑溶解在適量的溶劑中，制備高濃度的修飾試劑溶液。

反應：將修飾試劑溶液緩慢加入鏈霉親和素溶液中，維持反應體系的pH值在一定范圍內（如7.5左右），并在室溫下反應一段時間（如1~2小時）。

還原：向反應混合物中加入還原劑（如DL-二硫蘇糖醇DTT或三(2-羧乙基)膦TCEP），斷開二硫鍵，釋放出巰基（-SH）。反應在室溫下進行一段時間（如1小時）。

純化與保存：通過透析或凝膠過濾去除未反應的修飾試劑和還原劑，得到純化的巰基化鏈霉親和素。將純化后的溶液分裝，并低溫保存（如4°C或-20°C），以防止巰基氧化。

三、應用

巰基化鏈霉親和素在生物化學、免疫學和納米技術等領域具有廣泛的應用：

表面修飾：可用于修飾金納米顆粒、電極、微孔板等，通過巰基與金等表面形成穩定的共價鍵，從而改變這些表面的生物相容性和反應性。

共價連接：可以與其他含有馬來酰亞胺或其他巰基反應性基團的分子進行共價連接，用于構建復雜的生物傳感器和診斷試劑。

生物素檢測：可以結合生物素標記的分子，如抗體、核酸、蛋白質等，在免疫分析、分子生物學實驗和細胞成像等領域具有廣泛應用。

四、儲存條件與安全性

巰基化鏈霉親和素應在低溫條件下儲存，以防止巰基氧化和蛋白質變性。在使用時，應根據具體實驗需求調整其濃度，以獲得最佳的實驗效果。此外，雖然巰基化鏈霉親和素在生物研究中具有廣泛的應用，但在使用過程中仍需注意其安全性，避免對人體和環境造成危害。

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